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组织样本处理 sample processing 组织样本处理服务包含:石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片/涂片 技术原理 石蜡切片(paraffin section)是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。 冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间。同时,由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤,因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用在临床诊断 特点 石蜡切片标本可以长期保存使用,为永久性显微玻片标本。 冰冻切片制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断.组织变化不大,能很好保存脂肪,类脂等成分。能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类,特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。 石蜡切片(paraffin section) 组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。教学中,光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。活的细胞或组织多为无色透明,各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差,在一般光镜下不易清楚区别出;组织离开机体后很快就会死亡和产生组织腐败,失去原有正常结构,因此,组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡,而能清晰辨认其形态结构。 (一)石蜡切片前的准备
(二)石蜡切片
(三)注意事项
冰冻切片(frozen section) 冰冻切片是指将组织在冷冻状态下直接用切片机切片。它实际上是以水为包埋剂,将组织进行冰冻至坚硬后切片的。在冰冻切片前组织不经过任何化学药品处理或加热过程,大大缩短了制片时间。同时,由于此法不需要经过脱水、透明和浸蜡等步骤,因而较适合于脂肪、神经组织和一些组织化学的制片,并作为快速切片的方法应用在临床诊断。
切片: 恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机,其基本结构是将切片机置于低温密闭室内,故切片时不受外界温度和环境影响,可连续切薄片至5-10μm。切片时,低温室内温度以-15℃~-20℃为宜,温度过低组织易破碎,抗卷板的位置及角度要适当,载玻片附贴组织切片,切勿上下移动。切好室温放置30min后,入4℃丙酮固定5~10min,烘箱干燥20min。PBS洗5min×3。进行抗原热修复,微波热修复也可,室温自然冷却。可用3%H2O2孵育5~10min,消除内源性过氧化物酶的活性。 细胞爬片 就是让玻片浸在细胞培养基内,细胞在玻片上生长,主要用于组织学,免疫组织化学,冰冻切片,细胞涂片,原位杂交等. 细胞爬片特点 1.玻片表面经过TC处理,双面均可使用 2.γ射线灭菌,保证无菌. 3.使用便捷,只需打开包装,将爬片放入孔板内,将细胞悬液滴到爬片上即可培养. 4.爬片厚度为0.17mm,直径为8mm/14mm/20mm/25mm.分别适用于48孔细胞培养板/24孔细胞培养板/12孔细胞培养板/6孔细胞培养板 5.超强吸附:该玻片表面具有永久的阳离子电荷,可以通过静电作用吸附冰冻切片组织或细胞,使之粘附在玻片上,进而在玻璃和切片组织之间形成共价键.因此,无需粘黏剂或者蛋白包被,该玻片也能牢固的粘附切片或细胞。 操作注意 使用细胞爬片时(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分,加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底,有时细胞生长边集现象,就是靠近壁边缘密度要高些,这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少) 比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后,加细胞悬液时只滴到玻片上,一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘(因为液体表面张力作用可以很容易做到这一点!),放在培养箱里,等细胞贴壁后,取出,再滴加培养基布满整个孔底,继续培养,这样玻片上的细胞生长的密度就会很集中. |