化学合成

Chemical translation

实验原理

基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段，通过PCR拼接的方法，获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。

技术应用

序列密码子优化，高效表达目的基因

基因、蛋白的功能研究

实验流程

实验结果展示

图1.2目的片段的酶切电泳结果（载体片段4700bp，目的片段900bp）

TROUBLESHOOTlNG

常见问题 FAQ

Q:基因化学合成相对基因调取有哪些优势？

A ：化学合成法虽不如基因调取(ORF)价格便宜，但在以下情况下具有无法比拟的优势：1）基因表达丰度低，难以通过ORF克隆获得目的基因序列；2）对序列进行密码子优化以提高表达量，如在原核表达系统中表达真核基因序列；3）化学合成序列与目标序列完全一致，不存在突变位点或SNP；4）用于微芯片的大量cDNA合成。

Q：可否将需要的酶切点位点增加至基因两端？

A：可以根据客户的后期实验需求，在目的基因两端增加合适的限制性内切酶切位点，客户获得基因克隆后可直接通过酶切亚克隆至所需的载体中，方便快捷，避免了长片段PCR扩增产生点突变的可能。

Q：什么是Kozak序列，为什么建议增加在基因起始密码子前？

A：科学家Kozak通过研究起始密码子ATG周边碱基定点突变后对转录和翻译所造成的影响，总结出在真核生物中起始密码子两端序列为：

G/N-C/N-C/N-ANNATGG,如GCCACCATGG、GCCATGATGG时转录和翻译效率最高，特别时-3位的A对翻译效率非常重要。因此这些序列被成为Kozak序列，常被应用于表达载体的构建中。

Q：进行蛋白表达时，可否增加蛋白分泌信号肽？

A：蛋白胞外分泌表达时，采用经优化的蛋白分泌信号肽是提高蛋白产量的重要途径之一。注意信号肽与靶蛋白的连接，不要由于错误的连接导致移码后不能够正常表达信号肽后面的靶蛋白。

Q：我应该如何读取测序报告？

A：测序结果中有两种文件类型：

“.sep”是基因序列文件，可以用记事本或DNAMAN等生物学软件打开；

“.ab1:是测序峰图文件，可以用chromas软件大扩，如图1.3所示：

图1.3测序报告截图

参考文献

1. J e a n  P e c c o u d. G e n e S y n t h e s i s: M e t h o d s and Protocols. Humana Press,2012.

2. Benjamin Lewin. Genes IX [M]. Pearson Education,2007.