产品简介：

• Femto-Sensitive ECLSolution是一种基于Luminol的高灵敏性、非放射性化学发光底物，用于检测免疫印迹中固定在膜上的辣根过氧化物酶（HRP），最低可检测fg级的抗原。持续发光时间长达4个小时，方便同一张膜多次曝光。

• 本产品可用于Western Blot，NorthernBlot,Southern Blot,DotBlot等实验中检测HRP标记的探针或者抗体。

贮藏条件：

室温保存6个月，4℃保存2年。

客户须自备试剂：

• 转印膜：PVDF或者NC膜，转印前应充分湿润。PVDF膜应先用甲醇湿润完全至均匀的半透明状后再用超纯水或者转印缓冲液湿润。

• 稀释液：TBS或者PBS

• 洗涤液：含0.05%的Tween-20的TBS（TBST）或者PBS（PBST）

• 封闭液：含5%脱脂奶粉的TBST或者PBST；或者含1%BSA的TBST或者PBST

• 一抗：一抗用封闭液稀释至10ng/mL到1ug/mL。不同公司的抗体要求稀释浓度不同，具体参考抗体说明书。

• 二抗：HRP标记的二抗用封闭液稀释至2ng/mL到100ng/mL。不同公司的抗体要求稀释浓度不同，具体参考抗体说明书。

• 其他：摇床，暗盒，剪刀，平头镊子等。

使用方法：

1. 按常规方法完成SDS-PAGE和电转膜操作，将转印好的膜从转膜装置上取下来，并用封闭封闭膜上的非特异结合位点，室温下在摇床上震荡封闭1小时或2-8℃静置封闭过夜。

2. 弃封闭液，加入一抗工作液，室温下摇晃孵育1小时或2-8℃静置孵育过夜。

3. 用洗膜缓冲液在摇床上震荡漂洗膜4-6次，每次至少5分钟。

4. 用标记HRP的二抗工作液室温下摇晃孵育1小时。

5. 重复步骤3，彻底洗掉没有结合的二抗。

6. 将试剂A 和试剂B按1:1的比例混合成ECL工作液，用ECL工作液充分覆盖膜后室温孵育1分钟。

7. 吸弃多余的ECL工作液，将膜置于两层保鲜膜之间，赶走膜与保鲜膜之间的气泡。

8. 将膜片吸附蛋白的面朝上置于暗盒中，于暗室中，取出胶片覆于膜表面，第一次曝光1min，之后根据结果调整曝光时间，以达到最佳效果。

9. 膜片也可以直接用成像系统直接扫描成像。

10. 在孵育后的最初30分钟内发光最强，发光最长可持续4小时，但随着时间的推移光信号逐渐减弱。

注意事项：

1. 不要混用或稀释本试剂以免降低敏感性。

2. 试剂A和试剂B1:1混合成ECL工作液，应该先用现配，ECL工作液推荐当天用完，最长时间不超过1个星期。

3. ECL工作液配制过程中吸取试剂A和试剂B时务必更换枪头。试剂A和试剂B污染会造成试剂失效。

4. 根据不同的实验选择合适的封闭剂。避免使用脱脂奶粉封闭液检测抗avidin/biotin系统。避免使用脱脂奶粉分泌液检测磷酸化蛋白质。

5. 使用足够体积的洗涤液、封闭液、抗体稀释液及ECL工作液，使液体能充分覆盖膜表面，避免膜变干。在各孵育和洗涤的过程中，最好使用水平托盘摇床。

6. 避免使用含有叠氮钠的缓冲液，叠氮钠会抑制HRP反应，干扰实验结果。

7. 请勿空手拿膜，务必全程戴手套并使用清洁的平口镊子夹膜。

8. 操作过程中请勿使用生锈的金属盒（如剪刀、镊子等），以免造成严重的背景。

9. 根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。

10. 曝光时间过长会使背景加深，曝光不足会导致条带模糊。

11. 如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。